第三幕：这是顾问官克雷斯佩尔家的一个房间。有肺病的姑娘安冬妮亚面对着大键琴，用优美的声音唱出：《小鸽子飞走了》后，又唱出了对霍夫曼的热恋。她的歌声和她去世的母亲一样动听。克雷斯佩尔考虑到女儿的身体，同时她的歌声使他忆起亡妻而痛苦，他告诫女儿不能再唱歌了，安冬妮亚就很悲寂地离开了房间。克雷斯佩尔很担心女儿的病况，因而迁怒于女儿的情人霍夫曼，命令刚进来的仆人法兰茨，禁止任何人进入房内，说罢就离去。听话的法兰茨，忙活了一整天后，这时不由得快乐地载歌载舞起来“不分昼夜，我都尽心尽力”。这时，霍夫曼来看望安冬妮亚。他和法兰茨讲了一些奇怪的话后，法兰茨就让霍夫曼进入房间了。霍夫曼坐在大键琴前，开始唱出：“这是悲切、疯狂地飞逝的情歌”，不久，安冬妮亚就进来了。两人高兴又碰面，梦想着来曰成为幸福的夫妻，也歌颂爱的永恒胜利。他虽然担忧未婚妻狂热地歌唱的后果，但安冬妮亚无法压制自己的感情，高唱着：《爱之歌》，果然很快肺部开始剧痛了。当她发觉父亲回来，立刻跑回自己的房间。法兰茨告诉克雷斯佩尔说米拉克勒博士来访，这时，他内心立刻涌现强烈的憎恶感，认为可能像爱妻那样，女儿也会被这个医生所杀。这时，米拉克勒博士发出邪恶的狞笑声出现，表示要为安冬妮亚治疗。躲在布帘后的霍夫曼，看到他的模样，也有种不祥的感觉，因而害怕起来。米拉克勒走向安冬妮亚的椅子，好像她已坐在那里那样，为她把脉，命令她唱歌。说罢，怪事就发生了，从远方传来她的歌声。这时，由神秘地取出药瓶，要她吃药的米拉克、拼命想把医生赶出去的父亲，以及担心陷入魔鬼之手，已经危在旦夕的安冬妮亚的霍夫曼等三人，唱出一段：“三重唱”。克雷斯佩尔终于把医生带走，霍夫曼才从躲藏之处走出来，再度跟迷惘的安冬妮亚见面，规劝她不可再唱歌，并约好明天再来看她后，也告别离去。当安冬妮亚孤零零地只有一个人在房间时，米拉克勒突然出现，在她耳边小声说话。这个魔鬼在挑逗她，尽管上苍给予你这种非凡才能，为什么要成为家庭生活的牺牲品?难道不想获得喝彩和名气?霍夫曼是一个虚伪的男人……等等，然后又消失了身影。这时，安冬妮亚想起霍夫曼真诚的爱，为了击败魔鬼的诱惑，便向挂在墙上的先母画像祷告。不料，米拉克勒再度出现，驱使妖术，呼叫出母亲的灵魂，规劝女儿再次歌唱。米拉克勒用小提琴拉出激烈的伴奏，安冬妮亚顺应母亲灵魂的呼唤，热烈地引吭高歌。中途当她发觉有异，想停止歌唱时，米拉克勒命令她必须继续下去。她不得不重新歌唱，在母亲的声音“可爱的孩子！”与米拉克勒的“激励”下，像发狂般地不停高歌，终因体力不支倒下。听到这骚动，克雷斯佩尔赶过来，把女儿抱在怀里，这时她嘴里还在哼唱着爱之歌，但不一会儿就断气了。克雷斯佩尔悲痛万分，看到霍夫曼进来，就拔出利剑对着他。霍夫曼喊着请医生来时，米拉克勒马上出现，为安冬妮亚把脉，然后像宣告胜利般表示姑娘已经断气，在克雷斯佩尔与霍夫曼绝望的叫喊中幕落。”