第二幕，第一场皇宫的大厅。阿苏尔和赛密拉米德在这里激烈地争吵着，唱出二重唱《如果性命很重要》。由于阿苏尔梦想成为下一任国王，便用赛密拉米德准备好的毒药毒害了前王尼诺。这时他愤怒地责问女王：“为何我得不到任何的报偿?”女王答说：“你这样的叛徒没有资格当国王！”此时，外面传来颂赞阿尔萨切将就任国王的庆祝音乐，赛密拉米德很高兴，阿苏尔则咬牙切齿地叫喊说：“在我倒下以前，我一定报仇！”第二场，神殿内部。奥罗告诉阿尔萨切说：“你就是尼诺和赛密拉米德所生的儿子尼涅。”然后把一卷可以当证明的纸草纸遗书交给他。上面写着：“我因被下毒药而死，我最爱的儿子尼涅请快救我，他一定会替我复仇。他们是阿苏尔和我邪恶的妻子。”当阿尔萨切知道母亲谋害父王的事实，无比惊讶又很悲痛。祭司们鼓励阿尔萨切必须复仇，但阿尔萨切很苦恼，亲手杀死阿苏尔是一定的，但却很难对母亲下手，因此唱出咏叹调《这凄惨灾祸的刹那》。第三场，赛密拉米德的房间。由于阿尔萨切态度冷淡，赛密拉米德觉得坐立不安。虽然她用甜言蜜语想亲近阿尔萨切，但他却丝毫没有反应。而阿尔萨切也很想把真相摊开，却老是无法开口，于是把尼诺的遗书拿给她看。赛密拉米德看了之后吓一跳，便和阿尔萨切唱出二重唱：《原来如此……那么把我杀了吧》。但阿尔萨切只是泪流满颊，不忍心杀了亲生母亲。赛密拉米德很懊悔自己是一个罪孽深重的母亲，遇到这样可怕的命运，但仍然因母子相逢而激动地和儿子相拥。不一会儿后，阿尔萨切向母亲告别、为了实现复仇而前往父王的墓前。赛密拉米德激励他，希望他能胜利归来，两人便一起退场。这时在姑娘们的陪伴下，伊丹纳斯和阿泽玛一起出现。虽然阿泽玛依旧在怀念着阿尔萨切，但伊丹纳斯仍不死心地恳求她能爱他。第四场，尼诺墓附近。阿苏尔和跟他同伙的太守们一起出现。太守们齐声谴责阿苏尔，怎么落得被指责是背叛者的下场，但阿苏尔却断言自己一定能杀死阿尔萨切夺取王位。他在叫嚷着这些激动言语之间，逐渐进入发狂状态，成为阿苏尔的狂乱场面唱着《太阳已经西沉》。过一会儿阿苏尔清醒后，便对伙伴们说：“我一定要去惩罚阿尔萨切”，说完便飞也似地赶到前王的墓地。第五场，尼诺墓前。阿尔萨切在奥罗的引导下来到这里，因一片漆黑，伸手不见五指。奥罗命令他立刻拔剑杀敌，他便在黑暗中搜寻敌人。这时阿苏尔也来了，同样在寻找阿尔萨切。可是在黑暗中两人都找不到对方的身影，阿苏尔失去了踪迹。接着，赛密拉米德也来了，她跪在尼诺墓前祷告说：“请保佑阿尔萨切”。阿尔萨切听出母亲的声音，但继续搜索敌人。阿苏尔再度出现，两人都发觉彼此接近了。在黑暗中继续着三重唱之间，奥罗突然大叫：“惩罚吧！” 阿尔萨切疯狂般挥舞利剑，结果赛密拉米德便被击伤倒地。这时卫兵们出现，即刻逮捕了阿苏尔。当阿尔萨切茫然地发呆时，祭司们围著他，认定他为新王，在众人高呼：“国王万岁”声中，幕落。(有时为了避免结局中杀死母亲的行为过于残酷，就让阿苏尔承担这最后一击。)