第二幕，第一场：麦克白城堡内的一室。在城堡中，正如女巫们所预言的，麦克白成为苏格兰国王，但他心神不宁，他对于女巫所说“班柯将成为国王的父亲”的预言，深感到不安。于是夫人就耸恿他把班柯父子双双除掉以绝后患。丈夫走后，麦克白夫人就说为了保住王位，必须把所有的邪魔统统杀掉，唱出阴森森的咏叹调《光芒已渐消失》。第二场：麦克白城堡附近的公园。深夜，麦克白所派遣的刺客们埋伏在树后等待班柯父子从这儿经过。这时，班柯果然带着儿子来了，他说邓肯王被杀时也在这样阴暗、可怕的夜晚，于是唱出咏叹调“天空好像突然暗下来，要下雨了。”然后想快步离开，但来不及了，刺客涌上说道：“就让它下吧！”话音未落班柯被杀了，但幼子幸得逃脱。第三场：城堡内的大厅。堡内的大厅里正在举行着庆贺麦克白就任国王的欢宴，许多贵族和骑士们都被邀参加。麦克白唱着饮酒歌，但心情焦虑，这时有一名刺客前来向麦克白报告说，班柯已确实被杀，但儿子却逃掉了。麦克白半喜半忧，但当他要回座，却见班柯的幽灵血迹斑斑的坐在王位上（别人看不见只有麦克白一个人看得到），麦克白向鬼魂斥喝大叫，十分惊慌，他的夫人一面拼命想让丈夫镇定，一面劝止想离开的贵宾们，又引吭高歌《干杯之歌》。但鬼魂一再出现，使得麦克白神智慌乱，他拔剑攻击，全场立刻大乱。朝臣马克杜夫已隐约看出他的破绽。在大重唱中，麦克白夫人不为所动，但麦克白本人决定再一次造访女巫。